عنوان المقالة:إمكانية تضخيم الحمض النووي للأكنثاميبا مباشرة من عينات مأخوذة من القرنية Acanthamoeba DNA can be directly amplified from corneal scrapings
الهدف من هذه الدراسة تقييم إمكانية التضخيم المباشر للحمض النووي للأكنثاميبا في تشخيص إلتهاب القرنية الأكنثاميبي في الحالات المشتبه بها إكلينيكيا مقارنة بالفحص المجهري والمزرعة.
وقد أجريت هذه الدراسة على 110 مريض من المشتبه فيهم الذين يعانون من أشكال مختلفة من إلتهاب القرنية وتم تقسيم الحالات إلى مجموعتين رئيسيتين وفقاً لإستخدام العدسات اللاصقة على النحو التالى: مرتدى العدسات اللاصقة وعددهم 63 حالة. و غيرمرتدي العدسات اللاصقة وعددهم 47 حالة. وتم أخذ 110 عينة من القرنية وخضعت هذه العينات للفحص المجهري المباشر والزرع على أجارغيرمغذى ومزود بالمغذيات القولونية ، وتفاعل البلمرة المتسلسل
وقد أظهرت النتائج 21 (19.1٪) من الحالات المشتبه بها إكلينيكياَ مصابة بالأكنثاميبا ومنهم 17 (81٪) من مرتدى العدسات اللاصقة و 4 (19٪) من غيرمرتدي العدسات اللاصقة. وكشفت هذه النتائج عن وجود إرتباط إحصائى بين عدوى الأكنثاميبا وإرتداء العدسات اللاصقة (P <0.05).
بالنسبة للطرق المستخدمة في التشخيص وجد أن التضخيم المباشر للحمض النووي للأكنثاميبا بدون استخلاص الحمض النووي من العينات هو الأكثر إيجابية من المزرعة أو الفحص المجهري المباشر حيث كانت النتائج 21 (19.1٪) , 19(17.3%) وحالة واحدة فقط علي التوالي. ومقارنة بإستخدام المزرعة، أظهر إختبار تفاعل البلمرة المتسلسل 3 عينات إيجابية كانت سالبة بإستخدام المزرعة، كما أظهر عينة واحدة سالبة كانت موجبة بإستخدام المزرعة. أما بإستخدام الفحص المجهري المباشر وجدت 18 عينة سالبة كانت إيجابية بإستخدام المزرعة.
وبالتحليل الإحصائي كانت الحساسية ، والقيمة النوعية ، والقيمة التنبؤية الإيجابية ، القيمة التنبؤية السلبية ، ودقة التشخيص لتفاعل البلمرة المتسلسل هي 94.7٪ , 96.7٪ , 85.7٪ , 98.9٪ , 96.4٪ على التوالي بينما تلك التي بإختبار الفحص المجهري المباشر (5.3٪، 100٪، 100٪ , 83.5٪، 83.6٪، على التوالي).
واستنتج أن التضخيم المباشر للحمض النووي للأكنثاميبا بدون استخلاصه طريقة سهلة وحساسة
في تشخيص إلتهاب القرنية الأكنثاميبي وينبغي أن تستخدم في المراكز الطبية لتشخيص مرضي إلتهاب القرنية المشتبه فيهم .
الملخص الانجليزي
This study evaluated the performance of direct amplification of Acanthamoeba-DNA bypassing DNA extraction in the diagnosis of Acanthamoeba keratitis in clinically suspected cases in comparison to direct microscopic examination and in vitro culture. Corneal scrapings were collected from 110 patients who were clinically suspected to have Acanthamoeba keratitis; 63 contact lens wearers (CLW) and 47 non-contact lens wearers (NCLW). Taken samples were subjected to direct microscopic examination, cultivation onto the non nutrient agar plate surface seeded with Escherichia coli and PCR amplification. The diagnostic performance of these methods was statistically compared. The results showed that Acanthamoeba infection was detected in 21 (19.1%) of clinically suspected cases (110); 17 (81%) of them were CLW and the remaining 4 (19%) positive cases were NCLW. Regarding the used diagnostic methods, it was found that direct amplification of Acanthamoeba DNA by passing nucleic acid extraction was superior to microscopy and culture in which 21 cases (19.1%) were positive for Acanthamoeba by PCR compared to 19 positive cases by culture (17.3%) and one case (0.9%) by direct smear. The difference in detection rates between culture and direct smear was highly statistically significant (P= 0.001). On the other hand, there was no significant difference in detection rates between culture and PCR (P=0.86). On using culture as the gold standard, PCR showed 3 false-positive samples that were negative by culture and one false-negative sample that was positive by culture. At the same time, direct smear showed 18 false-negative samples. The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and diagnostic accuracy of PCR were 94.7%, 96.7%, 85.7%, 98.9%, 96.4% respectively. While those of direct smear were 5.3%, 100%, 100%, 83.5% 83.6% respectively. In conclusion, direct amplification of Acanthamoeba-DNA bypassing DNA extraction is a reliable, specific, sensitive method in diagnosis of Acanthamoeba keratitis in clinically suspected cases. It should set up in ophthalmological centers as an easy diagnostic tool.
ا.د. نجوى مصطفى السيد | Nagwa Mostafa El-Sayed | 3446