الأكنثاميبا هي نوع من الأميبا الحرة واسعة الإنتشار في البيئة و تسبب إلتهاب القرنية في الإنسان . تأخر التشخيص أو التشخيص الخاطئ يؤدي إلى زيادة إلتهاب القرنية وفقدان البصر. لذلك فإن التشخيص الدقيق والسريع لإلتهاب القرنية الأكنثاميبي يؤدي لنجاح العلاج و يعطي نتائج جيدة. وتهدف هذه الدراسة إلى إستخدام
تقنيات من الصبغات المختلفة لتسهيل التعرف على حويصلات الأكنثاميبا. وقد تم عزل حويصلات الأكنثاميبا بواسطة زراعة العينات المأخوذة من القرنية وعينات الماء على أطباق الأجار المزود بالمغذيات القولونية . وعمل مزرعة فرعية من المزرعة الإيجابية ثم عزل الحويصلات منفردة. وصبغت هذه الحويصلات بإستخدام الصبغات المؤقتة ; اليود، إيوسين، الميثيلين الأزرق، وكالكوفلور البيضاء وأيضا بالصبغات الدائمة ; صبغة التريكروم المعدلة ، جيمينيز والجيمسا. وقورنت هذه الصبغات على أساس جودة الصبغة بما في ذلك وضوح التفاصيل المورفولوجية، والتميز بين السيتوبلازم والنواة واللون والتباين وكذلك غيرها من الخصائص الأخرى مثل سهولة المناولة، والوقت الذي تستغرقه كل صبغة والتكاليف. و تبين أن الصبغات المؤقتة ذات كفاءة في توضيح التفاصيل المورفولوجية لحويصلات الأكنثاميبا. ومن جهة أخرى كانت صبغة التريكروم المعدلة للشرائح الأكثر ثباتا لرؤية حويصلات الأكنثاميبا تليها جيمينيز وجاء قي المرتبة الأخيرة الجيمسا التي أعطت أقل وضوحا لحويصلات الأكنثاميبا بسبب صبغها بلون موحد مع كثافة الخلفية. وقد أظهر ترتيب إستخدام الصبغات المرتبة الأعلى لصبغة اليود (92%) تليها صبغة الإيوسين (84%) ثم الجيمينيز (76%) والميثيلين الأزرق (72%) والكالكوفلور (64%) وصبغة التريكروم المعدلة56%) ) , وأقلهم صبغة الجيمسا (44 %).
الخلاصة: إستخدام تقنيات من الصبغات المختلفة يساعد علي زيادة التعرف على حويصلات الأكنثاميبا.
الملخص الانجليزي
Acanthamoeba is one of the most common freeliving
amoebae. It is widespread in the environment and can
infect humans causing keratitis. Delayed diagnosis or misdiagnosis
leads to extensive corneal inflammation and profound
visual loss. Therefore, accurate and rapid diagnosis of
Acanthamoeba keratitis is essential for successful treatment
and good prognosis. This study was designed to use different
staining techniques to facilitate the identification of
Acanthamoeba cysts. Acanthamoeba cysts were isolated by
cultivation of either corneal scraping specimens or tap water
samples onto non-nutrient agar plates seededwith Escherichia
coli. Subcultures were done from positive cultures until
unique cysts were isolated. Acanthamoeba cysts were stained
temporarily using iodine, eosin, methylene blue, and
calcofluor white (CFW) stains and as permanent slides after
processing for mounting using modified trichrome, Gimenez
and Giemsa staining. These stains were compared on the basis
of staining quality including clarity of morphological details,
differentiation between cytoplasm and nuclei, color and contrast,
and also other characteristics of the staining techniques,
including ease of handling, time taken for the procedure, and
cost effectiveness. The cysts of Acanthamoeba were recognized
in the form of double‐walled cysts: the outer wall
(ectocyst) that was being differentiated from the variably
stained surrounding background and the inner wall
(endocyst) that was sometimes stellated, polygonal, round,
or oval and visualized as separate from the spherical, sometimes
irregular, outline of the ectocyst. Regarding the temporary
stains, it was found that they were efficient for visualizing
the morphological details of Acanthamoeba cysts. In CFW
staining, Acanthamoeba cysts appeared as bluish-white or
turquoise oval halos although the internal detail was not
evident. On the other hand, the results of permanent-stained
slides showed the most consistent stain for identification of
Acanthamoeba cysts was modified trichrome followed by
Gimenez stain and lastly Giemsa stain that gave poor visibility
of Acanthamoeba cysts due to the intense staining background
and monochrome staining of parasite. In the present study,
multi-attribute ranking of the used staining techniques showed
the highest rank for iodine stain (92%) followed by eosin stain
(84 %), Gimenez stain (76 %), methylene blue (72 %), CFW
(64 %), modified trichrome (56 %), and the least was Giemsa
stain (44 %). In conclusion, the staining techniques enhance
the overall visibility of Acanthamoeba cysts.
ا.د. نجوى مصطفى السيد | Nagwa Mostafa El-Sayed | 3360