عنوان المقالة:تنقيه,ودراسه وراثيه جزيئيه للبروتين جي ذات المستقبل المزدوج من خميره الخبز وامصال مرضى الجلطه القلبيه Purification and Genetic Study of G-Protein Coupled Receptor from Saccharomyces cerevisiae and sera of Patients with Heart Thrombosis
اظهرت نتائج تنقيه البروتين المستخلص من الخلايا قمتين للبروتين عند استرداده بالمحلول الملحي المتدرج بينما لم تظهر اي قمة للبروتين في اجزاء الغسل و قد اقتصر وجود (GPCR) في القمة الاولى للبروتين عند التركيز (M 0.1 لل NaCl ) في الاجزاء من (3-9) ركزت هذه الاجزاء بالسكروز ومررت من عمود الترشيح الهلامي سيفاروس -6ب التي اعطت قمة واحدة فعالة لل (GPCR) للاجزاء (24-35). .
اما (GPCR) المستخلص من الغشاء الخلوي فتمت تنقيته بتقنية الترشيح الهلامي بخطوتين ففي الخطوة الاولى ظهرت قمم متعدة للبروتين باستخدام دارئ الاسترداد ، فقط قمة واحدة اعطت فعالية لل (GPCR) جمعت الاجزاء و ركزت بالسكروز و امررت للمرة الثانية على عمود الترشيح الهلامي تحت نفس الظروف و قد اعطت هذه الخطوة قمة واحدة للبروتين اعطت فعالية لل (GPCR) الوزن الجزيئي لل (GPCR) تم تحديدها بطريقة الترشيح الهلامي و كانت بحدود (~32.359KD )كيلو دالتون لل (GPCR) المستخلص من خلايا الخميرة و (~54.954) كيلو دالتون لل (GPCR) المستخلص من الغشاء الخلوي. .
و تم التأكد من نقاوة البروتين المعزول بأجراء الترحيل الكهربائي بوجود المواد الماسخة للبروتين (SDS-PAGE) حيث اعطت حزمة مفردة مع اوزان جزيئيه KD)33~) و(~55KD)على التوالي لل (GPCR) المستخلص من الغشاء الخلوي و خلايا الخميرة (S. cerevisiae) .
الملخص الانجليزي
The results of the purification of GPCR from membrane of S.cerevisiae by gel filtration chromatography illustrated multiple protein peaks appeared .One peak gave positive results for the GPCR concentration assay. Fractions representing GPCR were collected , pooled and concentrated by sucrose. In the second step five active fraction of the previous step were collected and applied once again on the same column and the same condition. This step gave a single peak which is identical with the peak of GPCR concentration .
The molecular weight of GPCR that estimated by gel filtration chromatography was approximately (32.359KD) for GPCR that extracted from whole cell and (54.954KD ) to GPCR extracted from membrane fraction. The purity of the GPCR ensured by SDS-PAGE electrophoresis which one band at ( 33 KD) was observed for GPCR extracted from whole cell, and single band at (55 KD) was noticed for GPCR extracted from cell membrane.
تاريخ النشر
25/02/2016
الناشر
كلية التربيه للعلوم الصرفه /ابن الهيثم /جامعة بغداد
نورهان خالد شفيق | Noorhan Khaled | 4175