عنوان المقالة:التحري الجزيئي والتعبير الجيني لمضخات الدفق في بكتريا Pseudomonas aeruginosa متعددة المقاومة للمضادات الحيوية Molecular detection and Gene expression of Efflux Pumps in Multidrug resistance Pseudomonas aeruginosa
نبراس رضا محمد | Nebras Rada Mohammed | 7994
نوع النشر
رسالة ماجستير
المؤلفون بالعربي
نبراس رضا محمد و محمد فرج شذر المرجاني
المؤلفون بالإنجليزي
Nebras Rada Mohammed and Mohammed Faraj
الملخص العربي
الخلاصة جمعت 120 عزلة تعود لبكتريا Pseudomonas aeruginosa المقاومة للكولستين للمدة من /15 2014/9 لغاية /11/15 2014, من مصادر سريرية مختلفة شملت : 33عزلة من الأدرار , و25عزلة من الحروق , و25عزلة من القشع , و17عزلة من الجروح , و 12عزلة من الدم, و 5عزلات من الأذن , و 3 عزلات من أدوات قثطرة المجاري البولية. أختبرت حساسية العزلات قيد الدراسة تجاه مضاد الكولستين بأستعمال طريقة الأقراص وأظهرت النتائج وجود 27 عزلة مقاومة للكولستين وبنسبة (%22.5) , أختبرت مقاومة60 عزلة (بضمنها العزلات المقاومة للكولستين ) تجاه إثناعشر مضادا من مجاميع مختلفة, وحددت حساسية العزلات ومقاومتها للمضادات المايكروبية بأعتماد قياس قطر منطقة التثبيط بالمليمتر حول أقراص المضادات المستعملة , أظهرت النتائج أن جميع العزلات المختبرة كانت مقاومة بشكل تام لمضادات Amoxicillin و Carbencillin بينما أبدت العزلات مقاومة لمضاداتGentamicin بنسبة %70 و %56.6 Tobramycin و Lomefloxacin %58.3وكانت المقاومة أقل لمضادات Aztreonam %18.3و Polymyxin B بنسبة %18.3 وتلتها المقاومة لمضادNorfloxacin %13.3و Levofloxacin %11.6 فيما كانت أقل نسبة مقاومة تجاه Ciprofloxacin الأقل مقاومة وبنسبة %8.3. أختبرت قابلية (60) عزلة أعلاه على إنتاج أنزيم البروتييز وتكوين الغشاء الحيوي وأظهرت النتائج قابلية % 88.3 من العزلات 53) عزلة )على أنتاج أنزيم البروتييز, وكانت جميع العزلات المقاومة للكولستين منتجة لأنزيم البروتييز وبنسبة %100 , من جانب اخر كانت 43 عزلة (%71.7) منتجة طبقة لزجة قوية محددة بوساطة تكوين مستعمرات سوداء دلالة على تكوينها الغشاء الحيوي . كشف عن وجود مضخات الدفق بين 60 عزلة من عزلات الدراسة ( منها 27 عزلة مقاومة لمضاد كولستين و 33 عزلة حساسة له) بأعتماد طريقة العجلة الخشبية Ethedium Bromide – Agar Cartwheel Method (EtBr CW) بأعتماد صبغة الأثيديوم برومايد كمؤشر للكشف عن مضخات الدفق , وأظهرت النتائج أن 46 عزلة (76.7%) من العزلات المختارة أعطت نتيجة موجبة للفحص أعلاه , ومن جانب اخر كانت جميع العزلات المقاومة للكولستين موجبة للفحص مما يدل على أمتلاكها لمضخات الدفق , أما بالنسبة للعزلات الحساسة للكولستين فكانت %33.3منها تملك مضخات دفق بالكشف المظهري . أخضعت 32 عزلة (27 منها كانت مقاومة للكولستين) للكشف الجيني عن مضخات الدفق بأستعمال تقنية Conventional PCRللكشف عن مضخة الدفق MexAB-OprM (بالكشف عن جينات oprMو (mexAومضخة الدفق MexXY (بالكشف عن جين mexY) أظهرت النتائج أن20 عزلة (62.5%) تمتلك الجينoprM , و أن 22عزلة (68.8%) تمتلك الجين mexA , و24 عزلة (75%) تمتلك الجينmexY , وبينت النتائج أيضا بخصوص الكشف الجيني عن مضخات الدفق لعزلات الدراسة أن جميع العزلات الموجبة لأختبار أمتلاك الجين mexYهي مقاومة للكولستين وقد شكلت نسبة %88.9 من العزلات الكلية المقاومة للكولستين . كشف عن التعبير الجيني لمضخة الدفق OprM-MexAB (بدراسة الجين (mexB ومضخة الدفق MexXY ( بدراسة الجين mexX) في 9 من عزلات الدراسة والتي كانت مقاومة لمضاد الكولستين بأستعمال تقنية q RT-PCR من خلال أستخلاص RNA البكتيري , ومن ثم تحويله الى cDNA , وأظهرت نتائج الكشف عن التعبير الجيني للجين mexB و الجين mexXأن العزلات كانت متباينة في قيم ct , وبحسب معادلة Livak وأستخرجت قيم ct ومعرفة التعبير الجيني لمضخات الدفق , ولوحظ أن التعبير الجيني لمضخة الدفق MexXY أكثر من التعبير الجيني لمضخة الدفق MexAB-OprM , وأن مضخة الدفق MexXY كان لها تعبير أعلى من مضخة الدفق MexAB-OprM التي كان تعبيرها صفر عند أضافة مضاد كولستين .
الملخص الانجليزي
Summary A total of (120) clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were collected from different sources , During the period between 15/9/2014 till 15/11/2014 . The source of these isolates were as follows : 33 isolates from urine , 25 isolates from Burns , 25 isolates from sputum , 17 isolates from Wounds , 12 isolates from Blood , 5 isolates from ears ,and the last 3 isolates from Catheters . All isolates were identified through morphological , cultural and some biochemical tests and using Vitek2 GN . The antibiotic susceptibility test Towrd Colistin was done using the agar diffusion method ; Results showed that 27 isolates 22.5% were resistance to Colistin ,then Sixty isolates ( Ones 27 isolates resistance to Colistin ) were tested against twelve antibiotic by measuring inhibition zone around disk antibiotic , Result showed that All isolates were complete resistance to Amoxicillin and Carbencillin , While resistance to other antibiotic were Gentamycin 70% , Tobramycin 56.6% , Lomefloxacin 58.3% , and less resistance was showed for Aztreonam 18.3% , Polymyxin B 18.3%, Norfloxacin 13.3% , Levofloxacin 11.6% and Ciprofloxacin 8.3% ,The most effective antibiotic against Colistin resistance isolates were Levofloxacin and Ciprofloxacin . Sixty of isolates were choosen to detect for ability to protease production and biofilm formation , The Results showed 53 isolates 88.3% were protease production , and results showed all Colistin resistant isolates were protease production and 43 isolates 71.7% were able to biofilm formation . Sixity isolates (Ones 27 Colistin resistance isolates ) were choosen for detect efflux pumps by using Ethedium Bromide – Agar Cartwheel Method (EtBr CW) , which include ethedium bromide dye as marker to detect efflux pumps , the result showed that 46 isolates 76.7 % give positive result . Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was performed done using specific primer targeting the specific sequences of the mexA , mexY, oprM gene , The results showed that oprM found in 20 isolates 62.5% , mexA found in 22 isolates 68.8% , mexY found in 24 isolates 75% , The results also showed that 88.9 % from Colistin resistant isolates had mexY gene . Detection of gene expression was performed done by using q RT-PCR technique after RNA extraction of Colistin resistant isolates and c DNA synthesis , The results showed that gene expression were high in efflux pumps especially to MexXY efflux pumps , and the gene expression to MexXY efflux pumps higher than MexAB-OprM efflux pums .
تاريخ النشر
06/03/2016
الناشر
نبراس رضا محمد
رقم المجلد
رقم العدد
رابط الملف
تحميل (252 مرات التحميل)
الكلمات المفتاحية
pseudomonas aeruginosa, efflux pumps
رجوع