عنوان المقالة:الكشف عن الجين mexX المسؤول عن مقاومة مضخة الدفق MexXY للكولستين في بكتريا Pseudomonas aeruginosa Detectin of mex responsible for resistance MexXY efflux pumps resistance colistin Pseudomonas aeruginosa
الملخص
جمعت 120 عزلة تعود لبكتريا Pseudomonas aeruginosa من مصادر سريرية مختلفة شملت : 33عزلة من الأدرار , و25عزلة من الحروق , و25عزلة من القشع , و17عزلة من الجروح , و 12عزلة من الدم, و 5عزلات من الأذن , و 3 عزلات من أدوات قسطرة المجاري البولية.
أختبرت حساسية العزلات قيد الدراسة تجاه مضاد الكولستين بأستعمال طريقة الأقراص وأظهرت النتائج وجود 27 عزلة مقاومة للكولستين وبنسبة (%22.5) .
كشف عن وجود مضخات الدفق بين 60 عزلة من عزلات الدراسة ( منها 27 عزلة مقاومة لمضاد كولستين و 33 عزلة حساسة له) بأعتماد طريقة العجلة الخشبية Ethedium Bromide – Agar Cartwheel Method (EtBr CW) بأعتماد صبغة الأثيديوم برومايد كمؤشر للكشف عن مضخات الدفق , وأظهرت النتائج أن 46 عزلة (76.7%) من العزلات المختارة أعطت نتيجة موجبة للفحص أعلاه , ومن جانب اخر كانت جميع العزلات المقاومة للكولستين موجبة للفحص مما يدل على أمتلاكها لمضخات الدفق , أما بالنسبة للعزلات الحساسة للكولستين فكانت %33.3منها تملك مضخات دفق بالكشف المظهري .
أخضعت 32 عزلة (27 منها كانت مقاومة للكولستين وخمس عزلات حساسة للكولستين ) للكشف الجيني عن مضخات الدفق بأستعمال تقنية Conventional PCR لمضخة الدفق MexXY (بالكشف عن جين mexY) أظهرت النتائج أن 24 عزلة (75%) تمتلك الجينmexY , وبينت النتائج أيضا بخصوص الكشف الجيني عن مضخات الدفق لعزلات الدراسة أن جميع العزلات الموجبة لأختبار أمتلاك الجين mexYهي مقاومة للكولستين وقد شكلت نسبة %88.9 من العزلات الكلية المقاومة للكولستين .
كشف عن التعبير الجيني لمضخة الدفق MexXY ( بدراسة الجين mexX) في 9 من عزلات الدراسة والتي كانت مقاومة للكولستين بأستعمال تقنية q RT-PCR من خلال أضافة مسحوق الكولستين للعزلات البكتيرية ثم أستخلاص RNA البكتيري , ومن ثم تحويله الى cDNA , وأظهرت نتائج الكشف عن التعبير الجيني للجين mexX أن العزلات كان لها تعبير جيني عالي جدا , ولوحظ أن التعبير الجيني لمضخة الدفق MexXY عالي وأن مضخة الدفق MexXY كان لها تعبير جيني عالي جدا بأضافة 2 ملغم /لتر من مسحوق الكولستين للعزلات المقاومة للكولستين , بينما العزلات الحساسة للكولستين لم تعبر جينيا .
Abstract
A total of 120 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were collected from different sources , The source of these isolates were as follows : 33 isolates from urine , 25 isolates from Burns , 25 isolates from sputum , 17 isolates from Wounds , 12 isolates from Blood , 5 isolates from ears ,and the last 3 isolates from Catheters .
The antibiotic susceptibility test towrd Colistin was done using the agar diffusion method ; results showed that 27 isolates (22.5%) were resistance to Colistin .
Sixity isolates (27 Colistin resistance isolates ) were choosen for detect efflux pumps by using Ethedium Bromide – Agar Cartwheel method (EtBr CW) , which include ethedium bromide dye as marker to detect efflux pumps , the result showed that 46 isolates 76.7 % give positive result .
Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was performed using specific primer targeting the specific sequences of the mexY gene , The results showed that mexY found in 24 isolates (75%) , The results also showed that 88.9 % from Colistin resistant isolates had mexY gene .
Detection of gene expression was performed done by using q RT-PCR technique after RNA extraction of Colistin resistant isolates and c DNA synthesis , The results showed that gene expression were high in efflux pumps especially to MexXY efflux pumps in resistance Colistin isolates but not found gene expression in sensitive Colistin isolates .
نبراس رضا محمد | Nebras Rada Mohammed | 18968