بن عمر شبة -طه ابراهيم زغلول - احمد رفيق المهدي و محمدهشام المصري
English Authors
Ben Amar Cheba -Taha Ibrahim Zaghloul - Ahmad Rafik EL-Mahdy - Mohammad Hisham EL-Massry
Abstract
Bacillus sp. تمت تنقية R2 chitinase إلى التجانس باستخدام ترسيب كبريتات الأمونيوم بنسبة تشبع 80٪ ، وكروماتوجرافيا تقارب على عمود الكيتين قشرة السلطعون المتضخم ، وتلاه كروماتوجرافيا الترشيح الهلامي في Sephadex G-100 ؛ تمت تنقية الإنزيم إلى 14.89 ضعف وعائد 14.77٪ على التوالي.
علاوة على ذلك ، خضع إنزيم الكيتيناز المنقى لثلاث تقنيات تثبيت على عشر ناقلات صلبة مختلفة ؛ 1- تثبيت الامتزاز الفيزيائي على الفحم المنشط وناقلات هلام السيليكا. 2-الارتباط التساهمي على الكيتين والكيتوزان قشرة السلطعون ؛ 3-أيوني ملزم على CM-Sepharose و Q-Sepharose و DEAE Cellulose و Amberlite IRC 50 و Amberlite CG-120 (NA) و Amberlite CG -4B (OH) على التوالي. أظهرت نتائج التثبيت أن الربط التساهمي والأيوني كان أفضل التقنيات بينما أعطى الشيتوزان والأمبرلايت IRC50 والكيتين أعلى إنتاجية للتثبيت 72.9 و 70.26 و 63.53٪ مع أعلى إنتاجية نشاط 63.36 و 58.26 و 53.03٪ على التوالي.
تعمل هذه النتائج على تحسين فعالية الكيتين قوقعة السلطعون المتضخمة كمصفوفة لتنقية تقارب الكيتيناز بينما الكيتين والشيتوزان كالبوليمرات الحيوية الطبيعية النشطة لإنتاج الكيتيناز المستمر من خلال التثبيت.
Abstract
Bacillus sp. R2 chitinase was purified to homogeneity using ammonium sulphate precipitation at 80% saturation, affinity chromatography on swollen crab shell chitin column, and followed by gel filtration chromatography on Sephadex G-100; the enzyme was purified to 14.89-fold and yield of 14.77%, respectively.
Furthermore the purified chitinase was subjected to three immobilization techniques on ten various solid carriers;1-physical adsorption immobilization on activated charcoal and silica gel carriers; 2-covalent binding on crab shell chitin and chitosan; 3-Ionic binding on CM-Sepharose, Q-Sepharose, DEAE Cellulose, Amberlite IRC 50, Amberlite CG-120 (NA) and Amberlite CG -4B (OH)respectively. Immobilization results revealed that covalent and ionic binding were the best techniques whereas chitosan, Amberlite IRC50 and chitin gave the highest immobilization yields 72.9, 70.26 and 63.53% with the highest activity yields 63.36, 58.26 and 53.03% respectively.
These findings improve the effectiveness of swollen crab shell chitin as matrix for chitinase affinity purification whereas chitin and chitosan as active natural biopolymers for chitinase continuous production through immobilization.
بن عمر شبة | benamar cheba | 15497