مدونة أ.د. علاء هاشم يونس الطائي
الطرق الرئيسية للتعقيم داخل مختبرات زراعة الأنسجة
أ.د. علاء هاشم يونس الطائي | Prof-Dr-Alaa Hashim Younis Altaee
31/05/2020 القراءات: 10585
الطرق الرئيسية للتعقيم داخل مختبرات زراعة الأنسجة :
1- التعقيم الحراري الجاف :- ( Dry heat Sterilization )
تستخدم هذه الطريقة لتعقيم الأدوات الزجاجية والأواني المعدنية المصنوعة من الحديد غير القابل للصدأ والمواد الأخرى التي لا تتضرر بدرجات الحرارة المرتفعة يستعمل لهذا الغرض أفران التجفيف الاعتيادية والتي تعمل بالغاز أو الكهرباء .
يتم التعقيم على درجة حرارة 160 م لمدة أربع ساعات , ويجب لف الأدوات والأوعية المراد تعقيمها بورق ألمنيوم ثم توضع في فرن التعقيم .
2- التعقيم الحراري الرطب :
يستعمل جهاز التعقيم ( Autoclave ) والذي يعمل بوجود بخار الماء وضغط مناسب . يتم التعقيم على درجة حرارة 121م وضغط مقداره 1.04 كغم / سم3¬¬ ¬لمدة 20 دقيقة , يجب أن يبدأ التوقيت بعد أن تصل درجة الحرارة داخل الجهاز الى 121 م وبعد انتهاء فترة التعقيم يجب أن يترك الجهاز بحيث يعود الضغط إلى المستوى الاعتيادي حيث أن التخفيف المفاجئ للضغط يؤدي إلى غليان السائل وخروجه من الوعاء الموجود فيه . كما يجب تجنب التعقيم لفترات طويلة لأنه يؤدي الى تحطم المركبات الكيمياوية الموجودة في وسط الزراعة .
3- التعقيم بأشعة كاما :
تعتمد على قابلية الأشعة الكهرومغناطيسية على قتل الأحياء المجهرية والدقيقة وبدا التعقيم بالإشعاع وخاصة للمواد المصنوعة من البلاستيك .
4- التعقيم باستعمال المواد الكيمياوية : ( تعقيم الجزء النباتي )
أي إزالة الكائنات الدقيقة كافة والتي تنمو على السطح الخارجي للجزء النباتي المستخدم في زراعة الأنسجة كالبكتريا والفطريات وغيرها وتشمل عملية التعقيم السطحي :
1- غسل الجزء النباتي بالماء والصابون لعدة مرات لإزالة الأتربة والأوساخ العالقة به .
2- الغسل بالماء المقطر والمعقم عدة مرات ثم إضافة مواد التعقيم وهي :
( هايبوكلورات الصوديوم , هايبوكلورات الكالسيوم , كلوريد الزئبق , كحول اثيلي , بيروكسيد الهيدروجين , ماء البروم ) .
وعموما الوقت اللازم للتعقيم يتناسب عكسيا مع تركيز المادة المستخدمة للتعقيم ويفضل استخدام تركيز قليل من المادة الفعالة ولمدة زمنية أطول ولزيادة كفاءة التعقيم يمكن استخدام جهاز خلخلة الضغط وذلك لزيادة اختراق مواد التعقيم الى داخل الجزء النباتي فتزداد بذلك كفاءة التعقيم . أما إذا كان الجزء النباتي ملوث بأحياء مجهرية فهناك عدة طرق للقضاء على مثل هذه الملوثات منها :
1- المعاملة بالحرارة : يعامل الجزء النباتي بالحرارة قبل استئصاله حيث يتم حفظ النبات بدرجة حرارة 34-40 م لعدة أيام وهذه الطريقة فعالة للقضاء على البكتريا والفطريات وبعض الرواشح .
2- وضع النبات في الظلام : قبل استئصال الجزء المراد زراعته حيث أنها تسبب زيادة استطالة النبات وان السرعة في النمو تنجي القمة النامية من الإصابة بالمسبب المرضي .
3- استخدام المضادات الحيوية : مثل الجنتامايسين والامبيسيلين .
4- استخدام نباتات ناتجة من الزراعة النسيجية .
تعقيم الأوساط الغذائية :
بما أن الوسط الغذائي يحتوي على معظم المواد الغذائية اللازمة لنمو الأحياء المجهرية الدقيقة لذلك يجب تعقيم الوسط الغذائي قبل الزراعة وهناك عدة طرق منها :-
1- التعقيم بالبخار :- من أكثر الطرق المستخدمة لتعقيم الأوساط الغذائية في جهاز الاوتوكليف حيث يوضع الوسط الغذائي في دورق ثم يوضع في الجهاز ويجب تحديد الفترة الزمنية لأنها إذا كانت قليلة فسوف لن تقضي على جميع الأحياء المجهرية في حين تؤدي فترة التعقيم الطويلة الى تحلل بعض مكونات الوسط الغذائي وتتراوح فترة تعقيم الوسط 15 – 20 دقيقة .
2- التعقيم البارد : هناك مركبات تتأثر بالحرارة مثل الجبرلين والابسيسك أسيد والزياتين وبعض منظمات النمو لا يمكن تعقيمها بالحرارة لذلك ترشح بواسطة مرشحات دقيقة 0.22 مايكرون – 0.45 مايكرون ثم تضاف الى الوسط الغذائي قبل أن يتصلب .
3- التعقيم بالإشعاع : يستخدم لتعقيم بعض الأوساط الغذائية وهي طريقة ممكن اعتبارها خطرة وذلك لأنها تؤدي إلى تكسر العديد من الأحماض الامينية والفيتامينات والسكريات .
تعقيم الزجاجيات والمواد البلاستيكية :
يمكن أن تعقم الزجاجيات والمواد البلاستيكية بعدة طرق من أهمها :
1- التعقيم بالبخار بواسطة الاوتوكليف ( Autoclave ) على درجة حرارة 121 م .
2- التعقيم الجاف بالفرن على درجة حرارة 160 م لمدة 2 – 4 ساعات للزجاجيات .
3- استخدام اللهب عند فتح فوهة وعاء الزراعة .
4- الكحول الاثيلي تركيز 70 % ....................
5- اوكسيد الاثيلين تركيز 1.5 غم / لتر .............
6- استخدام هايبوكلورات الصوديوم ...................
يغسل الجزء النباتي المستعمل تحت تيار من ماء الحنفية لمدة ساعة أو أكثر وهذه تقلل من نسب التلوث إلي درجة كبيرة وإذا كان السطح الخارجي مغطى بطبقة شمعية فإن غسيل الجزء المنفصل بإحدى مساحيق الغسيل يساعد على جعل السطح الخارجي أكثر قابلية للبلل.
1) يوضع في كحول إيثانول 70 % لمدة نصف إلى واحد دقيقة ثم يغسل بالماء المقطر.
2) يوضع في هيبوكلوريت الصوديوم (الكلوروكس) 5 - 20 % لمدة ثلث ساعة مع الرج والتقليب المستمر .
3) يغسل بالماء المقطر المعقم 4-5 مرات للتخلص من آثار المادة المعقمة وبعدها يصبح الجزء النباتي قابل للزراعة . الخطوات من 2 حتى 4 تجري داخل الهود ....
تعقيم - زراعة نسيجية
يجب تسجيل الدخول للمشاركة في اثراء الموضوع
بارك الله فيك
ربي يحفظكم وبعطيكم الصجة
شكراا في ميزان حسناتكم ان شاء الله
شكرا جزيلا تحياتي